问题分析：用结核菌素注射冷冻和保存精液其方法简单方便易于推广.该方法除需要培养基外仅需要1个液氮容器10小筒及液氮即可.它较之常用的安瓿麦杆管或球型器冷存法有冷冻前操作程序少无需解冻后操作及可选择的人工授精方式多的优点.这种冷存法冷存的精液质量类似麦杆管法其精子生存力和授精力可与麦杆管球型器安瓿法媲美.到目前为止已有许多关于改善冷冻保存人体精液的报告.在这些报告中均采用液化氮含蛋黄培养基以及甘油.采用含蛋黄培养基已很普遍但其优点也受到怀疑.最近蛋黄游离培养基的应用获得成功.冷冻精液可保存于安瓿麦杆管或球型器中三种保存形式都需要在冷冻前和解冻后的多次操作程序.本文介绍使用结核菌素注射器冷冻和保存精液.由于注射器可在人工授精时使用故仅需部分冷冻前的操作程序而无需解冻后的操作.材料和方法精液标本取自正常供精者和不育夫妇男方精子正常者.液化后精液与改良Mahadevan冷冻保护培养基混合该培养基含NaCl 100mM;KCl5.37mM;MgSO4 0.49mM;NaH2PO2H2O 0.32mM;NaHCO3 3095mM;乳酸钙2.46mM;蔗糖50.00mM;甘氨酸133.33mM;葡萄糖5.56mM;HEPES(二羟基二次乙基乙胺乙烷碳酸)20.00mM;甘油2054.00mM和人血浆白蛋白4gm/L.除甘油和人血浆白蛋白外其余溶剂应被溶解于500ml的蒸馏水中.边搅拦溶液边逐滴加入甘油最后再逐渐加入人血浆白蛋白.用1N NaOH将pH调整至7.0.再加入双蒸馏水使培养基总量为1升.培养基中甘油的最后浓度为7.5%（wt/vol）.培养基被滤过消毒后分送于无菌塑料管中加盖在-20℃下保存.用10厘米长的结核菌素注射器抽入部分精液冷冻保护培养基的混合液再用一带针帽的细针或椎形封闭器严密封闭.为防止解冻时封闭物脱落在注射器内吸入1ml空气从而允许注射器内容物在解冻时膨胀.用颜色标记注射器的管心部位后即置注射器于一小筒内再直接放入贮存液氮的容器中.解冻时为减少封闭器脱落先将注射器在室温下放置1分钟然后再置于温水（25-30℃）5分钟解冻后擦干注射器以防水进入授精套管内.剩余的精液-冷冻保护培养基混合液被抽入0.2ml的法国麦杆管中.用密闭粉封口后置麦杆管于小筒中在缓慢降入液氮容器内的液体之前先置于稍高于液氮面的液氮蒸气中保留10分钟.解冻时麦杆管置于室温下5分钟即可.
