问题分析:药敏实验方法主要包括药敏纸片法、牛津杯法和打孔法。其中打孔法易操作,比较适用于商品药物的检测。以下主要介绍打孔法。
一、方法
在“超净台”中(可用经消毒过的箱子等代替),用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环(可自己用铜丝制作,制作的好坏主要看环蘸取培养液后是否能形成水膜)挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
1、接种:用灭菌接种环(将接种环在火焰上灼烧,放凉)取适量细菌至培养皿周围四点,然后逐点、依次划线,直至细菌均匀密布于平皿。(也可将玻璃棒烧弯做成L型,挑取待试细菌液于培养皿中心,用灭菌L型玻璃棒将待检细菌液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密)。
2、打孔:用无菌操作将灭菌的不锈钢小管(一般外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米,管的两端要光滑,一般可用玻璃管、瓷管等),放置在培养基上打孔,将孔中的培养基用针头挑出,并以火焰封底,使培养基能充分的与平皿融合(以防药液渗漏,影响结果)。(市场有售成品,但做之前最好在火焰上过一下,以免来回搬动造成其脱离平皿)
3、加样:按不同药液加样,样品加至满而不溢为止。(建议提前做好标记,以免将不同药品孔弄混)
4、培养:将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后,观察效果。(单独培养需倒置,避免外界细菌污染;加过药液的不可倒置,以免药液流出)
5、结果判定:按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。
抑菌圈直径(毫米)在20以上极敏;15—20高敏;10—14中敏;10以下低敏;0不敏
多黏菌素抑菌圈(较特殊):在9毫米以上为高敏,6—9毫米为低敏,无抑菌圈为不敏。